測定BOD5時的水樣稀釋法分為一般稀釋法和直接稀釋法兩種。其中，一般稀釋法需要較多的稀釋水或接種稀釋水。
一般稀釋方法是在1L或2L量筒中加入約500mL稀釋水或接種稀釋水，然后加入一定體積的水樣計算，加入稀釋水或接種稀釋水至滿刻度，用玻璃杯末端帶有橡膠盤的桿被緩慢提起或浸沒在水面下。最后用虹吸管將混合均勻的水樣溶液引入培養(yǎng)瓶中，并使充滿溢出少許，小心蓋好瓶塞，并水封瓶口。對于第二或第三稀釋比例的水樣，可用剩余的混合溶液，計算后加入一定量的稀釋水或接種稀釋水，以同樣的方法混合后引入培養(yǎng)瓶中。
直接稀釋法是先用虹吸法將約一半體積的稀釋水或接種稀釋水引入已知體積的培養(yǎng)瓶中，然后沿瓶壁注入按稀釋倍數(shù)計算出的每個培養(yǎng)瓶中應(yīng)加入的水樣體積，然后將稀釋水或接種稀釋水引入瓶頸，小心蓋上瓶塞，用水封住瓶口。
使用直接稀釋法時，要特別注意稀釋水的最后引入或稀釋水的接種不能太快。同時，需要尋找最適體積的操作規(guī)律，避免因溢出過多而導(dǎo)致誤差。
無論采用哪種方法，將水樣引入培養(yǎng)瓶時，動作一定要輕柔，避免產(chǎn)生氣泡，防止空氣溶入水中或水中氧氣溢出。同時，需要確保在關(guān)閉瓶蓋時一定要小心，以免瓶內(nèi)有氣泡影響測量結(jié)果。培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時，應(yīng)每天都要檢查其水封情況，及時加水，防止封口的水蒸發(fā)，造成空氣進(jìn)入瓶內(nèi)。另外，5d前后使用的兩個培養(yǎng)瓶的體積必須相同，以減少誤差。
稀釋水的質(zhì)量對BOD5的測定結(jié)果的準(zhǔn)確性意義重大，因此要求稀釋水空白5日耗氧必須小于0.2mg/L，最好能控制在0.1mg/L以下，接種稀釋水5日耗氧應(yīng)在0.3~1.0mg/L之間。
對有硝化效果的污水處理系統(tǒng)的出水進(jìn)行BOD5測量時，由于其中含有許多硝化細(xì)菌，測定成果中就包含了氨氮等含氮物質(zhì)的需氧量。
一般BOD5（五日生化需氧量）常用的是稀釋法，選擇原樣品或經(jīng)適當(dāng)稀釋的樣品進(jìn)行測定，然后用適當(dāng)?shù)谋稊?shù)進(jìn)行稀釋，使培養(yǎng)瓶中有足夠的溶解氧以滿足五日生化的需氧要求。將滿足上述條件的樣品分成兩份，一份測定當(dāng)天的溶解氧質(zhì)量濃度，另一份放入20攝氏度的培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)5天后再檢測溶解氧的質(zhì)量濃度，這兩種樣品的差就是五日生化需氧量，即BOD5。
BOD是水體中的好氧微生物在一定溫度下將水中有機(jī)物分解成無機(jī)質(zhì)，這一特定時間內(nèi)的氧化過程中所需要的溶解氧量，是表示水中有機(jī)物等需氧污染物質(zhì)含量的一個綜合指標(biāo)。但是污水中各種有機(jī)物得到完會氧化分解的時間，總共約需一百天，為了縮短檢測時間，一般生化需氧量以被檢驗的水樣在20℃下，五天內(nèi)的耗氧量為代表，稱其為五日生化需氧量，簡稱BOD5，對生活污水來說，它約等于完全氧化分解耗氧量的70%。
無論使用哪中方法，在將水樣引入培養(yǎng)瓶時，動作必須要輕緩，避免發(fā)生氣泡，以防空氣溶入水中或水中氧氣溢出。同時要保證在蓋緊瓶蓋時一定要細(xì)心，避免瓶內(nèi)留有氣泡而影響測定結(jié)果。培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時，每天都要檢查其水封情況，及時填水，以防止封口水份蒸干而使瓶內(nèi)進(jìn)入空氣。此外，5d前后使用的兩個培養(yǎng)瓶的體積必須相同，以減小誤差。
水質(zhì)BOD是指在有氧的條件下，水中微生物分解有機(jī)物的生物化學(xué)過程中所需溶解氧的質(zhì)量濃度。為了使水質(zhì)BOD檢測數(shù)值有可比性，一般規(guī)定一個時間周期，并測定水中溶解氧消耗情況，一般采用五天時間，稱為五日生化需氧量，記做BOD5。水質(zhì)BOD是一種環(huán)境監(jiān)測指標(biāo)，用于監(jiān)測水中有機(jī)物污染情況，有機(jī)物都可以被微生物分解，此過程中需要消耗氧，如果水中溶解氧不足以供給微生物的需要，水體就處理污染狀態(tài)。
生活污水與工業(yè)廢水含有大量有機(jī)物，這些有機(jī)物在水體中分解時要消耗大量溶解氧，從而破壞水體中氧的平衡，使水質(zhì)惡化。生化需氧量是屬于利用水中有機(jī)物在一定條件下所消耗的氧，用來表示水體中有機(jī)物的含量的一個重要指標(biāo)。
水作為一種資源，根據(jù)其用途，不僅有量的要求，還必須有質(zhì)的要求，人類在生產(chǎn)與生活活動中，將大量的工業(yè)廢水、生活污水及其他廢棄物排入水體，造成地表水和地下水等水源的污染，引起水質(zhì)惡化，從而影響人體健康。所以，人們在水環(huán)境方面所面臨的問題是必須充分合理地保護(hù)、使用和改善水資源，使其不受或少受污染。水質(zhì)監(jiān)測正是以此為目的，以海洋、江、河、湖泊、水庫、地下水等水體和工業(yè)廢水、生活污水的排放口為對象而進(jìn)行監(jiān)督、檢測，以檢查水的質(zhì)量是否符合國家規(guī)定的有關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及排放標(biāo)準(zhǔn)要求，為控制水污染、保護(hù)水資源提供依據(jù)。
化學(xué)需氧量（COD）是指廢水中氧化物質(zhì)被化學(xué)氧化劑氧化時所需的氧量，以氧毫克/升為單位。這是目前測定廢水中有機(jī)物含量最普遍的手段。COD分析中常用的氧化劑有高錳酸鉀（錳法comn）和重鉻酸鉀（鉻法CODcr），現(xiàn)在常用重鉻酸鉀法。廢水在強(qiáng)酸加熱沸騰回流的條件下氧化有機(jī)物，以硫酸銀為催化劑時，大部分有機(jī)物的氧化率可提高到85-95%。廢水中含有高濃度氯離子時，應(yīng)該用硫酸汞切斷氯離子，減少COD的測定干擾。
生活污水與工業(yè)廢水中含有大量各類有機(jī)物。當(dāng)其污染水域后，這些有機(jī)物在水體中分解時要消耗大量溶解氧，從而破壞水體中氧的平衡，使水質(zhì)惡化。水體因缺氧造成魚類及其他水生生物的死亡。水體中所含的有機(jī)物成分復(fù)雜，難以一一測定其成分。人們常常利用水中有機(jī)物在一定條件下所消耗的氧，來間接表示水體中有機(jī)物的含量，生化需氧量即屬于這類的一個重要指標(biāo)。
